基于nir S基因的反硝化细菌快速定量检测

基于nir S基因的反硝化细菌快速定量检测引言：反硝化真菌是重要的环境微生物，它们可以利用硝酸盐作为电子受体，将有机化合物氧化成CO2或甲烷，并释放氮气。确定反硝化微生物的存在和数量对于了解环境的氮循

nirS 基于基因的反硝化细菌快速定量检测 引言： 反硝化真菌是重要的环境微生物，它们可以利用硝酸盐作为电子受 体，将有机化合物氧化成CO2或甲烷，并释放氮气。确定反硝化微生物 的存在和数量对于了解环境的氮循环过程非常重要。在基于pCR的检测 方法中，核酸的扩增以及组织构建都是需要耗费大量时间和难以实现 的。因此，发展快速，准确而且可靠的检测方法得到广泛的研究。基于 nirS的检测方法由于具备高度特异性和灵敏度等优点而成为了被广泛应 用的检测方法之一。 方法： 在反硝化微生物的代表性菌株中包括ThiodenitrificansspATCC 43217、Thiobacillusthioparus、Pseudomonasdelftii等，nirS常通 过PCR扩增的方法检测反硝化微生物的存在和数量。PCR反应的条件 为：反应体系总体积20μL，包含10mMTris-HClpH8.3，50mM KCl，2.5mMMgCl2，4μM基质，0.2mMdNTPs（Bioline， London，UK），0.5UTaqpolymerase（Biocolor，Daresbury， UK），5μL抽提的DNA样品，0.5μM的正向引物Fpniro （5'-TGACCGCACHCCRGCAYGAYCARA-3'）和反向引物Rpniro （5'-TTYTCARGTTCAGGTKGASGGAT-3'）。PCR反应程序如下：1） 30s的预变性步骤（94°C）；2）35个循环，每个循环包括30s的变性 步骤（94°C），30s的退火步骤（52°C），1分钟的扩增步骤 （72°C）；3）最终扩增步骤进行10分钟（72°C）。在PCR反应完成 后，约5μLPCR反应体系样品通过1.2％（w/v）琼脂糖凝胶电泳分离 和卡嚓QCTrakStandardDNALadder（Invitrogen，Carlsbad， CA）考核察看是否含有所有已知的标准碱基对。 结果：