人DDR2基因pShuttleCMV穿梭载体的构建及表达0

人DDR2基因pShuttleCMV穿梭载体的构建及表达　　 作者：任婷婷，刘新平，车红磊，张健，张璟，李霞，苏金 【摘要】 目的：构建带有flag标签的人DDR2 pShuttleCMV载体，

人DDR2基因pShuttleCMV穿梭载体的 构建及表达 作者：任婷婷，刘新平，车红磊，张健，张璟，李霞，苏金【摘 要】目的：构建带有flag标签的人DDR2pShuttleCMV载体，检 测其真核表达并观察DDR2分子的亚细胞分布.方法：以含有人全 长DDR2cDNA的质粒为模板，用PCR方法扩增DDR2基因的C端 （DDR2C），并在其C末端带上含24bp的flag标签，NcoI/EcoRV 酶切后亚克隆入含有DDR2全长序列的pMD18T载体，即替换掉原有 DDR2序列的C端，引入flag标签，测序正确后再克隆入 pShuttleCMV表达载体，酶切鉴定正确后采用脂质体法瞬时转染 HEK293细胞，WesternBlot检测DDR2flag在细胞中的表达.瞬时 转染Hela细胞，通过间接免疫荧光法观察DDR2分子在细胞内的分布 情况.结果：测序及酶切显示DDR2flag/pShuttleCMV载体构建符 合预期；脂质体法转染HEK293细胞，24h后用WesternBlot方法 检测到目的蛋白的表达；对转染了目的载体的细胞应用FITC标记 的抗体进行间接免疫荧光实验，激光共聚焦显微镜观察到DDR2分子 主要分布于细胞质与细胞膜.结论：成功构建并表达了C末端带 flag标签的DDR2真核表达载体，使其在真核细胞中表达，并观察到 其亚细胞分布.代写论文 【关键词】聚合酶链式反应毕业论文