HBV X基因对成人肝细胞HL7702线粒体功能的影响

HBV X基因对成人肝细胞HL7702线粒体功能的影响　　作者：林纳, 李 丹, 陈红英, 陈治新, 王小众 【摘要】 目的: 研究HBV X基因与线粒体COXⅢ基因相互作用以及对线粒体功能的影

HBVX基因对成人肝细胞HL7702线粒 体功能的影响 作者：林纳,李丹,陈红英,陈治新,王小众 【摘要】目的:研究HBVX基因与线粒体COXⅢ基因相互作用以及 对线粒体功能的影响。方法:将HBVX基因真核表达载体pCDNA3X 及空载体pCDNA3转染成人肝细胞HL7702细胞,经过2周G418筛 选,获得稳定表达的新细胞株,分别命名为HL7702/HBx和 H7702/pcDNA3,RTPCR和Westernblot方法证实HBVX基因在 HL7702/HBx细胞内的稳定表达。抽提细胞总RNA进行半定量RTPCR 及分离细胞线粒体进行Westernblot检测COXⅢ表达水平变化, 并通过酶动力学方法检测线粒体细胞色素氧化酶活性。结果:重组质 粒pcDNA3X转染后经G418筛选,RTPCR和Westernblot分析结 果显示HL7702HBx细胞能够稳定表达HBVX基因。RTPCR和 Westernblot结果发现HBVX基因下调COXⅢ蛋白表达而不影响 mRNA水平表达。酶动力学检测发现线粒体细胞色素C氧化酶活性降 低。结论:HBVX基因通过转录后水平调节COXⅢ表达,HBx通过与 COXⅢ相互作用抑制线粒体细胞色素氧化酶活性。 2结果