斜纹夜蛾几丁质脱乙酰酶基因克隆及功能研究的任务书

斜纹夜蛾几丁质脱乙酰酶基因克隆及功能研究的任务书一、研究目的斜纹夜蛾（Spodoptera litura）是危害全球蔬菜、棉花、茶叶等作物的重要害虫之一。目前研究表明，几丁质脱乙酰酶是斜纹夜蛾种群对几

斜纹夜蛾几丁质脱乙酰酶基因克隆及功能研究的任务 书 一、研究目的 斜纹夜蛾（Spodopteralitura）是危害全球蔬菜、棉花、茶叶等作 物的重要害虫之一。目前研究表明，几丁质脱乙酰酶是斜纹夜蛾种群对 几丁质降解能力的重要因素。因此，本研究旨在克隆斜纹夜蛾几丁质脱 乙酰酶基因并初步探究其功能，为斜纹夜蛾危害防治提供新的分子靶 标。 二、任务内容 1.几丁质脱乙酰酶基因序列的克隆 （1）收集斜纹夜蛾全长cDNA文库，利用RT-PCR和RACE技术 克隆几丁质脱乙酰酶基因序列； （2）对所克隆的基因序列进行多序列比较，建立系统发育树，分析 斜纹夜蛾几丁质脱乙酰酶的进化关系并与其他昆虫物种进行比较。 2.基因表达谱分析 （1）采用qRT-PCR技术，分析几丁质脱乙酰酶基因在斜纹夜蛾各 发育阶段、不同组织及几个环境因子（温度、湿度等）作用下的表达 谱，筛选出主要表达位点和调控因子； （2）利用RNAi技术沉默几丁质脱乙酰酶基因，观测其对斜纹夜蛾 消化能力和生长发育的影响。 3.几丁质脱乙酰酶活性鉴定 （1）通过蛋白表达和纯化，制备出几丁质脱乙酰酶重组蛋白； （2）利用几丁质为底物，测定几丁质脱乙酰酶的酶活性，并探究其 对不同几丁质聚糖的降解能力；