微卫星不稳定性癌细胞论文

微卫星不稳定性癌细胞论文 微卫星不稳定性癌细胞论文预读: 摘要:1材料和方法向每组样品中分别加入PCR试剂盒中各反应体系及特定位点引物.反应步骤：95℃预变性5min；94℃变性30s,54℃退火30

微卫星不稳定性癌细胞论文 ::1 微卫星不稳定性癌细胞论文预读摘要材料和方法 PCR.95 向每组样品中分别加入试剂盒中各反应体系及特定位点引物反应步骤：℃预变性 5min9430s,5430s,721min,7210min,30. ；℃变性℃退火℃延伸℃最后延伸循环次聚丙烯酰 (PAGE)PCR30%10% 胺凝胶及银染法检测微卫星位点扩增后产物：用丙烯酰胺母液及过硫 (APS)12%,3μL,,150V 酸铵配制聚丙烯酰胺凝胶各样品上样后于垂直电泳槽中电压持续电 2h.、,0.25%3%,0.2% 泳用乙醇冰乙酸配制成固定液硝酸银溶液为染色液及氢氧化钠甲醛配 .、.ABI3730XL 制的显色液进行银染显色反应并用凝胶化学发光成像仪照相分析自动测序仪 PCRsanger,4(ddNTP) 对扩增产物进行测序：基于法种双脱氧核苷酸的碱基分别用不同的 ,ABI3730XL,, 荧光进行标记自动测序仪对待测样品进行毛细管电泳通过毛细管时不同长度 DNA4,,CCD, 的片段上的种荧光基团被激光激发发出不同颜色的荧光被检测系统识别并 DNA.、10 直接翻译成序列主要观察指标：人脐静脉内皮细胞人皮肤成纤维细胞和株人癌 5. 细胞在个微卫星位点的扩增片段长度 2Results 结果 2.15 人脐静脉内皮细胞和人皮肤成纤维细胞个微卫星位点长度 5PCR. 人脐静脉内皮细胞和人皮肤成纤维细胞在个位点上的产物长度均一致经测序仪测 ,21bp,2., 序该株细胞的扩增序列长度相差在以内见表说明人皮肤成纤维细胞人脐静脉内 5,(1). 皮细胞的个微卫星位点长度具有一致性及稳定性可作为正常对照图 2.2 各株细胞的微卫星不稳定性分析 ,,HCT-116BAT-25、 以人脐静脉内皮细胞人皮肤成纤维细胞为正常对照人结肠癌细胞在 BAT-26、CAT-25、NR-24 位点扩增片段长度较人脐静脉内皮细胞及人皮肤成纤维细胞均缩 (1A-D),27-13bp,HCT-1164 短图表的测序结果显示缩短产度为说明在这个位点上显现微 ,.SEC-63,HCT-116 卫星不稳定性属于微卫星高不稳定性细胞而在位点扩增片段长度与人脐 、(1E),1bp(2),HCT-116 静脉内皮细胞人皮肤成纤维细胞持平图片段长度仅差表说明在该微 .BIU-87BAT-25、BAT-26、CAT-25 卫星位点稳定人膀胱癌细胞在位点扩增片段长度均较 (1A-C),8-13bp(2), 人脐静脉内皮细胞及人皮肤成纤维细胞缩短图缩短长度为表表现为微卫 ,.NR-24、SEC-63,BIU-87 星不稳定属于微卫星高不稳定细胞在位点扩增片段长度与人脐静 、(1D-E),(2),. 脉内皮细胞人皮肤成纤维细胞持平图片段长度相似表显现微卫星稳定性以人 ,K562、SGC-7901、HepG2、A549、 皮肤成纤维细胞和人脐静脉内皮细胞为正常对照 GLC-82、NCI-H446、Hela、EJ5(1), 细胞在个微卫星位点无扩增片段长度变化图片段长度 2bp(),. 差异在以内测序结果略显现微卫星稳定性 3Discussion 讨论 BAT-25(c-kit) 该标准使用单核苷酸位点：原癌基因内含子区的微卫星位点和 BAT-26(hMSH25):D5S346、D2S123、 第个内含子区域的单腺苷酸重复片段及二核苷酸位点 D17S250.BAT-25BAT-26, 为标志位点检测微卫星不稳定性其中和是单核苷酸重复序列研 ,(quasimonomorphic) 究显示它们在人体细胞中保守性好属于几近单态性的标志 [31-32].() 用它们检测微卫星的不稳定性避免了必须用同源来自同一个体的正常组织细胞为 ,, 对照的必要性可以用人正常细胞做对照使得直接应用肿瘤细胞株研究微卫星不稳定性成为 .CAT-25(caspase23’)、NR-24(2)SEC-63( 可能位于基因的非翻译区锌指蛋白和编码内质网 )BAT-25BAT-26, 膜的蛋白质是继和之后被推荐用于检测微卫星不稳定性的高敏感单态性 [33],BAT-25、BAT-26CAT-25、NR-24、SEC-63 位点合并可以准确而全面地检出癌细胞的 ,99%[34].,2 微卫星稳定状态准确率在以上本实验中株人正常细胞株：人皮肤成纤维细胞和 ,5(1bp), 人脐静脉内皮细胞在上述个位点扩增产物几乎保持一致扩增片段长度差异在以内 5.,10 佐证了这个位点确为几近单态性的微卫星位点同时研究通过比较株人癌细胞在上述