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生物技术实验心得体会　　基因克隆技术是分子生物学的核心技术，其目的是获得某一基因或DNA片段的大量拷贝，用于深入分析基因的结构与功能，并可达到人为改造细胞以及物种遗传性状的目的。本论文主要从以下几个方

生物技术实验心得体会 基因克隆技术是分子生物学的核心技术，其目的是获 得某一基因或DNA片段的大量拷贝，用于深入分析基因的 结构与功能，并可达到人为改造细胞以及物种遗传性状的 目的。本论文主要从以下几个方面来介绍基因克隆技术： 目的基因的获得、目的基因和载体的连接、重组分子的扩 增和鉴定。 可概括为∶分、切、连、转、选。“分”是指分离制备合 格的待操作的DNA，包括作为运载体的DNA和欲克隆的 朗 汛 目的DNA；“切”是指用序列特异的限制性内切酶切开载体 娱 次 DNA，或者切出目的基因；“连”是指用DNA连接酶将目的 拓 匪 侄 DNA同载体DNA连接起来，形成重组的DNA分子； 贤 姆 “转”是指通过特殊的方法将重组的DNA分子送入宿主细胞 愧 知 月 中进行复制和扩增；“选”则是从宿主群体中挑选出携带有 甫 粮 重组DNA分子的个体。基因克隆技术包括把来自不同生 调 裸 物的基因同有自主复制能力的载体DNA在体外人工连 携 恭 接，构建成新的重组DNA，然后送入受体生物中去表达， 灰 榷 从而产生遗传物质和状态的转移和重新组合。 睹 一.目的基因的获得 筹 嘱 目的基因是指所要研究或应用的基因，也就是将要克 褒 芽 僧 隆或表达的基因。获得目的基因是分子克隆过程中最重要 涨 媒 的一步。基因工程流程的第一步就是获得目的DNA片 页 贫 段,。所需目的基因的来源,不外乎是分离自然存在的基因 窑 斟 或人工合成基因。常用的方法有PCR法、化学合成法、 够 勾 cDNA法及建立基因文库的方法来筛选 PCR方法 缸 腊 篮 PCR是一种在体外快速扩增特定基因或DNA。聚 械 泼 合酶链式反应是体外酶促合成特异DNA片段的一种方 寓 国 法，由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一 胸 占 个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有特 卷 巫 楔 异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。它不仅可用 沾 倡 于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究，还可用于 市 璃 疾病的诊断或任何有DNA,RNA的地方。 藕 化学合成法制备基因片段 藻 仆 采用DNA合成仪，对目的基因进行分段合成，然后