苏木素复染法在HE染色中的应用毛成毅肖华亮杜娟钟鹏马瑜第三

苏木素复染法在HE染色中的应用毛成毅 肖华亮 杜娟 钟鹏 马瑜（第三军医大学大坪医院野战外科研究所病理科 重庆 400042）023-68757648 E-mail：20561689

苏木素复染法在HE染色中的应用 毛成毅 肖华亮 杜娟 钟鹏 马瑜 （第三军医大学大坪医院野战外科研究所病理科 重庆 400042） 023-68757648 E-mail：20561689@qq.com 摘要 目的 探讨苏木素复染法在HE染色中的应用价值，以提高HE染色质量的方法。 方法 组织经10%福尔马林固定、脱水、透明、浸蜡、包埋后切片3μm，常规脱蜡至水，经 结果 苏木素复染，伊红染色后常规法封片，光学显微镜下观察染色结果。组织结构清楚， 结论 细胞核呈蓝色，核膜、染色质清晰可辨，胞浆伊红染色层次分明，色彩鲜艳。 苏木 素复染法染色在病理组织染色中，可明显提高染色质量并延长试剂有效使用寿命。 关键词 HE染色 苏木素复染法 质量 苏木精 —伊红染色法 (hematoxylin-eosin staining )，简称HE染色法。该法由 于其具有染色迅速、色彩鲜艳、结果稳定，容易掌握、价格低廉等优点而成为动物及人体组 织染色的最常用染色法。在日常染色中由于受苏木素染色液成熟度、浓度及PH值等多方面 因素影响导致染色结果不理想。我科经探索实践发现用两缸苏木素经过初染及复染染色较传 统一缸苏木素染色质量有显著提高，我们称为苏木素复染法。现将该方法介绍如下： 1：材料与方法： 1:1材料及仪器 切片来源于我科常规活检及外院会诊；徕卡自动染色机，PH电子计 1:2方法 试剂配制 ：苏木素配制：苏木精1.5g 硫酸铝钾25g 无水乙醇20ml 蒸馏水500ml 碘 酸钠0.2g 0.5%醇溶性伊红：80%酒精500ml 醇溶性伊红2.5g 冰醋酸2滴 组织处理： 组织经10%福尔马林固定、脱水、透明、浸蜡、包埋后切片3μm 染色步骤： 60℃烤片10min 二甲苯Ⅰ：3min，二甲苯Ⅱ：4min 二甲苯Ⅲ:5min，无 水乙醇Ⅰ:1min，无水乙醇Ⅱ:2min,95%酒精1min，75%酒精1min，自来水冲洗2min，苏木 素Ⅰ：初染3min，苏木素Ⅱ:复染3min，自来水冲洗2min，0.5%盐酸酒精分化10s，自来 水冲洗2min，饱和碳酸锂水溶液15s，自来水冲洗2min，伊红15s，75%酒精30s，85%酒精 1min，95%酒精1min，无水酒精Ⅰ:1min，无水酒精Ⅱ:2min，二甲苯Ⅰ：1min，二甲苯Ⅱ： 2min，封片 苏木素每染色4500张左右更换第一缸，将后一缸前移，新旧搭配使用。 2：染色结果：组织结构清楚，细胞核呈蓝色，核膜、染色质清晰可辨，胞浆伊红染色 层次分明，色彩鲜艳。 3：讨论：经过我科实践证实经过苏木素复染法染色，染色效果及质量显著提高；我们 认为影响因素有以下3点： 1：浓度，苏木素液在使用过一段时间后由于切片带入水份及将苏木素液带出，而两缸 苏木素染液浓度更能保证， 2：成熟度，苏木素染液中使用的苏木精本身无染色能力，只有经过氧化，使苏木精的 分子结构失去两个氢原子，并使其中的一个苯环转化成具有醌型结构的苯环而成为苏木红。 （1） 苏木精被氧化为苏木红后，才成为一种染料。苏木精被氧化成苏木红的过程又称为成熟。 在常规工作中配制的苏木素染色液是人工自然氧化或者添加氧化剂氧化而成熟。通常我们为 尽量保证染液使用有效期更长而在配制苏木素染液时达到95%成熟度，让其在边使用变成熟。 两缸新旧苏木素搭配使用，先进入着色能力较差的旧苏木素预染，再进入氧化成熟度95%左 毛成毅男汉族病理技师