血清浓度及饥饿时间在HeLa细胞G0-G1期同步化中的影响

血清浓度及饥饿时间在HeLa细胞G0/G1期同步化中的影响 【关键词】 HeLa细胞; 血清饥饿法; 细胞周期同步化 在细胞周期的相关研究中通常要获得静止期细胞, 而根据研究者所需细胞群所处细胞周期

HeLaG0/G1 血清浓度及饥饿时间在细胞 期同步化中的影响 HeLa; ; 【关键词】细胞血清饥饿法细胞周期同步化 , 在细胞周期的相关研究中通常要获得静止期细胞而根据研究者所 ,, 需细胞群所处细胞周期的时相不同又有多种方法可供选择。其中 G0/G1 血清饥饿法是能将细胞周期停滞于期同时又较少影响细胞周 1, 2 期发育进程的一种简便有效的同步化方法［］。但采用血清饥 ,, 饿法对不同细胞系进行同步化处理时所得的效果又千差万别而且 , 大多数实验中无法任意选择已经摸索好条件的细胞系故实验室所 3 用细胞的血清饥饿法条件摸索在实验中极为重要［］。重点分析了 HeLa, 人类宫颈癌细胞（细胞）的同步化效果并对血清浓度及饥饿 时间进行了比较研究。 1 材料和方法 1.1 HeLa 材料人类宫颈癌细胞（细胞）引自中国科学院上海 RPMI1640Gibco 细胞所。培养基为美国公司产品。胎牛血清为 HYclone PI)(RNaseA) 公司产品。胰酶、碘化丙啶（及胰核糖核酸酶 SigmaFACSVantage SEBD 为美国公司产品。型流式细胞仪为公 司产品。 1.2 方法 1.2.1 100 mL/LRPMI1640 细胞培养培养基为含胎牛血清的培养 ,37℃ 50 mL/L CO2 液培养条件为、及饱和湿度的恒温细胞培养 箱中培养。 1.2.2 HeLa, 血清饥饿处理将细胞培养至指数生长期后弃掉原培 ,: 01 25 10 100 养液更换培养液的血清浓度分别为、、、、、 mL/L, ,20 26 32 38 44 50 继续培养然后分别在培养的、、、、、、 56 62 68 74 h, 3 、、、收集细胞每个处理独立重复实验次。 1.2.3 ,, PBS2 细胞周期检测消化细胞离心后弃胰酶洗涤离心次 750 mL/L 后弃上清。然后将采集的细胞均匀地分散在的预冷乙醇 ,4℃, PBS2, , 中置冷藏备用。检测时用离心洗涤细胞次除去乙醇 PBS(510×105 ), 加少量将细胞吹散每份要求细胞数为～加入 RNaseA(0.5 g/L), 37℃30 min, PI( 终浓度为反应加染液终浓度为 50 mg/L)PITriton X100, 15 min, （染液含）避光染色用 FACSVantage SEcellquest 型流式细胞仪检测。实验完毕后采用软 4 件分析各期的细胞含量［］。 2 结果