SDS-PAGE电泳的基本原理及浓缩胶浓缩样品的原理

SDS-PAGE电泳的基本原理及浓缩胶浓缩样品的原理SDS,PAGE电泳的基本原理及浓缩胶浓缩样品的原理 SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)是目前最常用的分离蛋白质的电泳技术 SD

SDS-PAGE电泳的基本原理及浓缩胶浓缩样品的原理 SDS,PAGE电泳的基本原理及浓缩胶浓缩样品的原理 SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳)是目前最常用的分离蛋白质的电泳技术 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS， SDS能断裂 分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，强还原剂能使半胱氨酸之间 的二硫键断裂，蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中，与SDS分子按比 例结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物，这种复合物由于结合大量的SDS，使 蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而 降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异，由于SDS与蛋白质的结合是按 重量成比例的，因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。当分 子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合 下式:logMW=K-bX，式中:MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分 子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质 在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。 SDS-PAGE电泳成功的关键是什么, ?溶液中SDS单体的浓度 SDS在水溶液中是以单体和SDS-多肽胶束的混合形式 存在，能与蛋白质分子结合的是单体。为了保证蛋白质 与SDS的充分结合，它们的重量比应该为1?4或1?3。 ?样品缓冲液的离子强 度因为SDS结合到蛋白质上的量仅仅取决于平衡时SDS单体的浓度，不是总浓 度，而只有在低离子强度的溶液中，SDS单体才具有较高的平衡浓度。所以，SDS 电泳的样品缓冲液离子强度较低，常为10-100 mM。 ?二硫键是否完全被还原 只 有二硫键被完全还原以后，蛋白质分子才能被解聚，SDS才能定量地结合到亚基上 从而给出相对迁移率和分子质量对数的线性关系。Sample buffer