浅论华支睾吸虫乳酸脱氢酶E10

浅论华支睾吸虫乳酸脱氢酶E10【摘要】 【目的】 原核克隆及表达华支睾吸虫乳酸脱氢酶(CsLDH)两个表位aa10-20(E10-20)及aa94-102(E94-102)，初步研究两表位与CsLDH

浅论华支睾吸虫乳酸脱氢酶E10 【摘要】【目的】原核克隆及表达华 支睾吸虫乳酸脱氢酶(CsLDH)两个表位 aa10-20(E10-20)及aa94-102(E94-102)，初 步研究两表位与CsLDH免疫学及酶学相互 关系。【方法】将E10-20及E94-102克隆 至pGEX-4T-1载体，表达纯化重组蛋白，用 WesternBlotting和间接ELISA法检测 CsLDH免疫血清对表位重组蛋白的识别，同 时检测两表位重组蛋白的免疫血清对CsLDH 蛋白的识别;利用CsLDH标准酶活性反应体 系，比较两表位免疫血清与CsLDH免疫血清 对CsLDH催化丙酮酸还原成乳酸反应的影 响。【结果】成功构建pGEX-4T-1-E10?鄄 20及pGEX-4T-1-E94-102重组质粒， SDS-PAGE鉴定表达的重组蛋白，菌体裂解液 经亲和层析纯化，获得与GST融合表达的蛋 白E10-20及E94-102。两表位重组蛋白均可 被CsLDH免疫血清识别，而对E94-102更易 于识别;重组CsLDH也能被E10-20及 E94-102免疫血清识别，而不能被对照血清