SDS研究实验报告

SDS研究实验报告 　　 　　一、研究背景及目的 　　 　　对于那些生物体内含量高、易于分离结晶获得纯品的蛋白，可以通过测定氨基酸序列，借助各种氨基酸的分子量求出蛋白的分子量，并与质谱等手段相互结合，

SDS研究实验报告 一、研究背景及目的 对于那些生物体内含量高、易于分离结晶获得纯品的蛋白， 可以通过测定氨基酸序列，借助各种氨基酸的分子量求出蛋白的分子 量，并与质谱等手段相互结合，得到精确可信的分子量。但对于那些 含量少，不易分离的蛋白，无法实现结晶，就必须借助其他手段测定 其分子量。 要找到能够测定分子量的实验手段，首先要考虑那些能够将 不同分子按照其各自的分子量分离的技术。在众多的技术当中，密度 梯度离心、层析、电泳都与物质的分子量有关。其中，超速离心机造 价高，使用过滤层析色谱测分子量要做标准曲线，柱长要求高，且这 些方法不够准确。因此，电泳技术成为了实现分子量测定这一目的的 最佳选择。 但是，在活性电泳中，影响蛋白前迁移率的因素有蛋白质的 电荷性质、分子大小和形状。要测定分子量，就要消除电荷、分子形 状对蛋白迁移率的影响，即使得各种蛋白的电荷、形状不存在显著差 异。对于电荷，使各分子不带电违背电泳的基本原理，而使各分子带 点完全相同是无法实现的，因此考虑使其带上大量电荷，从而让分子 之间的电荷差异可以忽略。在活性电泳中，改变样品的带电情况依靠 的是缓冲液pH的变化，显然不能够使分子大量带电，这就表明必须向 电泳体系中引入其他物质，与蛋白分子定量等量结合，且不改变分子 量差异造成泳动差异。对于分子形状，考虑到功能性蛋白大多是球形 粒子，要保持形状不变，就要实现对蛋白的包裹性结合。而蛋白表面