变性梯度凝胶电泳DGGE实验报告[修改版]

第一篇：变性梯度凝胶电泳DGGE实验报告变性梯度凝胶电泳DGGE 刘琳 1131428 环境科学 一、 实验目的 1． 学习掌握变性梯度凝胶电泳的原理和方法。 2． 练习变性梯度凝胶电泳的操作步骤。

DGGE 第一篇：变性梯度凝胶电泳实验报告 DGGE 变性梯度凝胶电泳 1131428 刘琳环境科学 一、实验目的 12 ．学习掌握变性梯度凝胶电泳的原理和方法。．练习变性梯度凝胶电泳的操作步骤。 3 ．分析并掌握变性梯度凝胶电泳的思路，并了解其在微生物群落研究中的地位。 二、实验原理 DNA 双链分子在一般的聚丙烯酰胺凝胶电泳时，其迁移行为决定于其分子大小和电荷。不同长度的 DNADNADGGE 片段能够被区分开，但同样长度的片段在凝胶中的迁移行为一样，因此不能被区分。技 术在一般的聚丙烯酰胺凝胶基础上，加入了变性剂（尿素和甲酰胺）梯度，从而能够把同样长度但序列不 DNA 同的片段区分开来。 DNA 不同的双链片段因为其序列组成不一样，所以其解链区域及各解链区域的解链温度也是不一样 DNA 的。同样长度但序列不同的片段会在胶中不同位置处达到各自最低解链区域的解链温度，因此它们会 在胶中的不同位置处发生部分解链导致迁移速率大大下降，从而在胶中被区分开来。然而，一旦温度（或 DNADNADNA 变性剂浓度）达到片段最高的解链区域温度时，片段会完全解链，成为单链分子，此时 DNA 它们又能在胶中继续迁移。因此，如果不同片段的序列差异发生在最高的解链区域时，这些片段就不 能被区分开来。 DNADGGE 片段在胶中的迁移行为（如下图）： 变性剂 Low