临床微生物学检验之药敏

临床微生物学检验纸片扩散法又称Kirby-Bauer(K-B)法，由于其在抗菌药物的选择上具有灵活性，且花费低廉，被WHO推荐为定性药敏试验的基本方法，已在临床广泛使用。实验原理 将含有定量抗菌药物的

临床微生物学检验 一、 纸片扩散法 Kirby-Bauer(K-B)WHO 又称法，由于其在抗菌药物的选择上具有灵活性，且花费低廉，被 推荐为定性药敏试验的基本方法，已在临床广泛使用。 （一） 实验原理 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂 中的水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试 菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定 MIC 药物的敏感程度，并与该药对测试菌的呈负相关。 （二） 培养基和抗菌药物纸片 1、 6.35mm20µl 抗菌药物纸片选择直径为，吸水量为的专用药敏纸片，用逐片加样或 2~8-20 侵泡方法使每片含药量达规定所示。含药纸片密封贮存℃或℃无霜冷冻箱内保 - 存，β内酰胺类药敏纸片应冷冻贮存，且不超过一周。使用前将贮存容器移至室温平 1~2 衡小时，避免开启贮存容器时产生冷凝水。 2、 Mueller-Hinton,M-HCLSI 培养基水解酪蛋白（）培养基是采用的兼性厌氧菌和需氧 pH7.2~7.4 菌药敏试验标准培养基，为，对那些营养要求高的细菌如流感嗜血杆菌、淋 4mm 病奈瑟菌、链球菌等需加入补充物质。琼脂厚度为。配置琼脂平板当天使用或置 43515 塑料密封袋中℃保存，使用前应将平板置℃温箱孵育分钟，使其表面干燥。 （三） 实验方法 0.5 实验菌株和标准菌株接种采用直接菌落法或细菌液体生长法、用麦氏比浊管标准的菌 15 液浓度，校正浓度后的菌液应在分钟内接种完毕。操作步骤如下： 1、 接种用无菌棉拭子蘸取菌液，在管内壁将多余菌液旋转挤去后，在琼脂表面均匀涂抹 360 接种次，每次旋转平板度，最后沿平板內缘涂抹一周。 2、 3~5 贴抗菌药物纸片平板置室温下干燥分钟，用纸片分配器或无菌镊子将含药纸片紧 24mm15mm 贴于琼脂表面，各纸片中心相距》，纸片距平板內缘》，纸片贴上后不可再 移动，因为抗菌药物会自动扩散到培养基内。 3、 3516~1824 孵育置℃孵育箱小时后阅读结果，对苯唑西林和万古霉素敏感等应孵育 小时。 （四） 结果判断和报告 用游标卡尺或直尺量取抑菌圈直径（抑菌圈的边缘应是无明显细菌生长的区域），先量取 质控菌株的抑菌环直径，以判断质控是否合格；然后量取试验菌株的抑菌环直径。根据 CLSI 标准，对量取的抑菌圈直径作出“敏感”、“耐药”、“中介”的判断。 （五） 质量控制 M-H0.5 对于肠杆菌科细菌，琼脂，生长法或直接菌落悬液法，相当于麦氏标准的细菌浓 35+-216~18ATCC25922 度，℃℃，空气，小时观察结果，质控菌株推荐为大肠埃希菌，大 ATCC35218-/- 肠埃希菌（为监控β内酰胺酶β内酰胺抑制剂纸片用）；对于铜绿假单胞菌 ATCC3521816~18 ；对于葡萄球菌属细菌，小时观察结果，测苯唑西林、甲氧西林、萘夫西 2435 林和万古霉素需小时，试验温度超过℃不能检测甲氧西林耐药葡萄球菌，推荐质控菌 ATCC25923ATCC35218 株为金黄色葡萄球菌，大肠埃希菌，纸片扩散法检测葡萄球菌对万 16~1824 古霉素的敏感性不可靠；对于肠球菌属细菌，小时观察结果，测万古霉素需小时， ATCC29212; 推荐质控菌株为粪肠球菌对于流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌，推荐质控菌株 ATCC49247ATCC49766ATCC35218 为流感嗜血杆菌，流感嗜血杆菌，大肠埃希菌（测试 /M-H 阿莫西林克拉维酸时）；对于肺炎链球菌和肺炎链球菌之外其他链球菌，培养基为琼 +5%35+-25%CO2,20~24 脂羊血，℃℃，小时观察结果，推荐质控菌株为肺炎链球菌