Microbacterium sp.XT11黄原胶内切酶在毕赤酵母中的异源表达、性质及应用

Microbacteriumsp. XT11黄原胶内切酶在毕赤酵母中的异源表达、性质及应用黄原胶是由野油菜黄单匏菌分泌的一种胞外杂多糖，主链由以0T,4糖普键相连的葡萄糖构成，甘露糖一葡萄糖一甘 露糖

黄原胶内切酶在毕赤 Microbacteriumsp.XT11 酵母中的异源表达、性质及应用 黄原胶是由野油菜黄单匏菌分泌的一种胞外杂多糖，主链由 以糖普键相连的葡萄糖构成，甘露糖一葡萄糖一甘 0T,4露糖 组成其侧链，分子质量一般为2X106-5X107Da［l］ o 研究发现，由黄原胶降解而来的低分子质量黄原胶可以抑制软 骨细胞凋亡［2］、治疗骨关节炎［3］,还具有抗氧化活性［4］、抑 菌［5］、清除自由基［6］等功效，具有较高的市场价值。因此， 常见 通过降解黄原胶生产低分子质量黄原胶具有重要的意义。 的多糖降解方法有物理法，化学法和生物酶法。 ［7］相对于物 理法和化学法，生物酶法反应条件温和、过程可控，因而被广 泛应用［8］。研究发现，与黄原胶降解直接相关的酶有黄原胶 内切酶、B-D-葡萄糖昔酶，黄原胶裂解酶、a-D-甘露糖甘酶、 不饱和葡萄糖醛酸酶，其中黄原胶内切酶是一种能随机切割黄 原胶主链的B-1,4-葡萄糖昔键的内切葡聚糖酶，对黄原胶的 降解起关键性作用［9］。LI等［10］对来自 Microbacteriumsp.XT11的黄原胶内切酶进行了研究，发现 其能直接作用于黄原胶主链使其降解。YANG等［H］将此黄原胶 内切酶在大肠杆菌中胞内表达，对其结构进一步研究，发现它 具有一般的内切葡聚糖酶具有的2个典型的结构域：具有催化 活性的催化结构域和只具有结合功能但无催化活性的碳水化 合物结合模块，推测其可能是来自GH9家族的新分酵液中的溶 氧量直接影响毕赤酵母的生长和代谢，一般通过调节转速等控 制溶氧量；合适的接种比能保证在毕赤酵母快速生长的同时大 量产生代谢产物［15］。所以对发酵转速（图4-c）和接种比（图 4-d）进行了优化。在摇瓶水平，重组毕赤酵母-pGAP9K-EX-12 表达黄原胶内切酶的最佳发酵条件为30℃、pH6.0、220r/min, 接种量5%。