山葡萄转色期果皮cDNA文库的构建与分析

山葡萄转色期果皮cDNA文库的构建与分析引言：作为一种常见的营养植物，山葡萄在欧洲等地非常受欢迎。其营养价值高，具有抗氧化、降低胆固醇、预防癌症等多种保健功效，在食品加工、医药等领域也有广泛的应用。因

cDNA 山葡萄转色期果皮文库的构建与分析 引言： 作为一种常见的营养植物，山葡萄在欧洲等地非常受欢迎。其营养 价值高，具有抗氧化、降低胆固醇、预防癌症等多种保健功效，在食品 加工、医药等领域也有广泛的应用。因此对山葡萄的生长发育、果实成 熟机理等的研究备受关注。果皮作为果实的外层，对果实生长发育至关 重要，其成熟过程与果实品质密切相关。构建山葡萄果皮cDNA文库， 可以通过高通量测序分析得到大量的果皮差异表达基因，为探索山葡萄 果皮成熟的分子机制提供了有力的工具。 一、材料与方法： 1.果实材料 本研究所用的山葡萄果实为“红宝石”品种，从成熟期开始采摘， 每3天采集一次，共采摘9个时间点的果实（第0天、第3天、第6 天、第9天、第12天、第15天、第18天、第21天、第24天）。果 实含糖量（Brix）和酸度（pH）分别用折射仪和PH计测定。果实表皮 剥离后，果皮冻存于-80℃。 2.RNA提取和纯化 采用Trizol法从山葡萄果皮中提取总RNA，经过纯化和去除DNA 残留后，利用NanoDrop2000光谱仪检测RNA的纯度和浓度，RNA 纯度>1.8，浓度>200ng/µL，符合建立文库的要求。 3.构建cDNA文库 采用SMARTer™cDNA合成试剂盒（Clontech）构建文库。其 中，总RNA先经过反转录，利用PCR扩增获得DS-cDNA，随后对 DS-cDNA进行SMRT（SwitchingMechanismat5'endoftheRNA Template）扩增，得到逆转录的基因cDNA（complementary