蛋白质相对分子质量的测定(SDS法)

蛋白质相对分子质量的测定(SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法)一、实验原理蛋白质在十二烷基硫酸钠（SDS）和巯基乙醇的作用下，分子中的二硫键还原，氢键等打开，形成按1.4gSDS/1g蛋白质比例的SDS-蛋

蛋白质相对分子质量的测定 (SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法) 一、实验原理 SDS 蛋白质在十二烷基硫酸钠（）和巯基乙醇的作用下，分子中的二硫键还原，氢 1.4gSDS/1gSDS- 键等打开，形成按蛋白质比例的蛋白质多肽复合物，该复合物带负电， 故可在聚丙烯酰胺凝胶电泳中向正极迁移，且主要由于凝胶的分子筛作用，迁移速率与蛋 白质的分子量大小有关，因此可以浓缩和分离蛋白质多肽。 聚丙烯酰凝胶电泳分离蛋白质多数采用一种不连续的缓冲系统，主要分为较低浓度的 pH 成层胶和较高浓度的分离胶，配制凝胶的缓冲液，其值和离子强度也相应不同，故电 SDS- 泳时，样品中的多肽复合物沿移动的界面移动，在分离胶表面形成了一个极薄的层 SDS- 面，大大浓缩了样品的体积，即聚丙烯酰胺凝胶电泳的浓缩效应。 二、仪器及器材 垂直电泳槽及附件、直流稳压稳流电泳仪、移液器等。 三、试剂 1 、 30g Acr0.8g -Bis 凝胶贮备液：称取丙烯酰胺（）和甲叉双丙烯酰胺（），蒸馏 100mL 水溶解后定容至，滤纸过滤贮存。 210% SDSSDS 10g 100ml 、：称取加蒸馏水至。 3 、 10%AP 过硫酸胺（），用时现配。 4 、 NNN’N’TEMED ，，，四甲基乙二胺（）。 5 、 3.03g Tris14.14g1.0g SDSHCL 电极缓冲液：、甘氨酸、溶于水，混匀后用调 pH8.31 000ml 节至，加蒸馏水至。 6 、 0.6gTris5mL1.0g SDS 样品溶解（缓冲）液：、甘油（丙三醇）溶于水，混匀 HCLpH8.00.1g2.5mL100mL 后用调节至，再加溴酚蓝、巯基乙醇，定容至。 718.17g Tris0.4gSDS1mol/L 、：、溶于水，混匀后用 下层胶（分离胶）缓冲液 HCLpH8.8100ml 调节至，加蒸馏水至。 86.06g Tris0.4gSDS1mol/L 、：、溶于水，混匀后用 上层胶（浓缩胶）缓冲液 HCLpH6.8100ml 调节至，加蒸馏水至。 925%10% 、固定液：异丙醇，乙酸。 R-250 100.125g250ml 、染色液：考马斯亮蓝加固定液。 1175ml50ml1000ml 、脱色液：冰乙酸、甲醇，加水定容至。