质粒抽提原理

为了方便理解，这里罗列一下碱法质粒抽提用到三种溶液：溶液I,50 mM葡萄糖 / 25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA，pH 8.0；溶液II，0.2 N NaOH / 1% SDS；

为了方便理解，这里罗列一下碱法质粒抽提用到三 种溶液：溶液I,50mM葡萄糖/25mMTris-Cl/10 mMEDTA，pH8.0；溶液II，0.2NNaOH/1%SDS； 溶液III，3M醋酸钾/2M醋酸。 让我们先来看看溶液I的作用。任何生物化学反应，首 先要控制好溶液的pH，因此用适当浓度的和适当pH值 的Tris-Cl溶液，是再自然不过的了。那么50mM葡萄 糖是干什么的呢？说起来不可思议，加了葡萄糖后最大 的好处只是悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底 部。因此，如果溶液I中缺了葡萄糖其实对质粒的抽提 本身而言，几乎没有任何影响。所以说溶液I中葡萄糖 是可缺的。那么EDTA呢？大家知道EDTA是Ca2+和 Mg2+等二价金属离子的螯合剂，配在分子生物学试剂中 的主要作用是：抑制DNase的活性，和抑制微生物生 长。在溶液I中加入高达10mM的EDTA，无非就是要 把大肠杆菌细胞中的所有二价金属离子都螯合掉。如果 不加EDTA，其实也没什么大不了的，只要不磨洋工， 只要是在不太长的时间里完成质粒抽提，就不用怕DNA 会迅速被降解，因为最终溶解质粒的TE缓冲液中有 EDTA。如果哪天你手上正好缺了溶液I，可不可以抽提 质粒呢？实话告诉你，只要用等体积的水，或LB培养 基来悬浮菌体就可以了。有一点不能忘的是，菌体一定 要悬浮均匀，不能有结块。 轮到溶液II了。这是用新鲜的0.4N的NaOH和2％的 SDS等体积混合后使用的。要新从浓NaOH稀释制备0.4