试验中常用试剂的配制和注意事项

RT-PCR实验操作步骤退火温度：这与你要PCR的模板DNA有关，不同的模板有不同的最适退火温度。在理想状态下，退火温度足够低，以保证引物同目的序列有效退火， 同时还要足够高，以减少非特异性结合。合理

实验操作步骤 RT-PCR ● PCRDNA 这与你要的模板有关，不同的模板有不同的最适退火温度。 退火温度： 在理想状态下，退火温度足够低，以保证引物同目的序列有效退火，同时还要 足够高，以减少非特异性结合。合理的退火温度从55℃到70℃。退火温度一般 设定比引物的Tm低5℃。 一所用试剂 . 缓冲液：高压灭菌，保存。临用前－放置分钟，确保冰冷。 MPBS,PH7.440C200C30 焦碳酸二乙酯：公司，保存。 2.(DEPC)sigma40C 处理的灭菌去离子水：去离子水中加入，剧烈振荡混匀，让充分进入 %DEPC100ml0.1mlDEPCDEPC 溶液中，放置过夜，高压蒸汽灭菌分钟除去。保存。 370C30DEPC40C 单相细胞裂解试剂：生命技术公司，保存。临用前－放置分钟，确保 4.TRizoLInvitrogen40C200C30 冰冷。 氯仿：用新开封的，分装，保存。临用前－放置分钟，确保冰冷。 5.10ml40C200C30 异丙醇：用新开封的，分装，保存。临用前－放置分钟，确保冰冷。 6.20ml40C200C30 处理的％乙醇：无水乙醇加处理的灭菌去离子水至，保存。临用 %DEPC7575ml0.1%DEPC100ml4C 前－放置分钟，确保冰冷。 200C30 反转录试剂盒：公司，－保存。 8.cDNAMBI200C 试剂：公司，－保存。 9.2xPCRMBI200C 电泳缓冲液：因为碱可与发生反应并使之失活，所以含碱的电泳缓冲液 10.5xTBERNATrisDEPCTris 可用处理的灭菌去离子水配制，滤器过滤除菌。室温保存，临用前用处理的灭菌去 DEPC0.22umDEPC 离子水倍稀释。使用本室专用电泳槽，每次需配制电泳缓冲液。 10RNA0.5x500ml 电泳缓冲液：室温保存，临用前用去离子水倍稀释。使用本室专用电泳槽， 11.50xTAEDNA50DNA 每次需配制电泳缓冲液。 1x1000ml 上样缓冲液：处理的灭菌离心管中称取溴酚蓝，加入甘油，处理 12.6x1.5mlDEPC2.5mg0.3mlDEPC 的灭菌去离子水定容至，保存。 1ml40C ％琼脂糖：电泳，琼脂糖加入电泳缓冲液中电泳琼脂糖加入 RNA1.5g0.5xTBERNA;DNA,1.5g 电泳缓冲液中。微波炉煮沸熔化后，冷却至左右，每胶加入溴化乙啶 1xTAEDNA600C100ml 。 (EB,10mg/ml)5ul