产红霉素C的糖多孢红霉菌A226G-突变体的构建

产红霉素C的糖多孢红霉菌A226G-突变体的构建作者:袁华,黄训端,张部昌,刘道琴,赵皓 单位:安徽大学生命科学学院，安徽省生态工程与生物技术重点实验室， 合肥230039 【摘要】 糖多孢红霉菌er

产红霉素C的糖多孢红霉菌A226G-突变体的构建 作者:袁华,黄训端,张部昌,刘道琴,赵皓 单位:安徽大学生命科学学院，安徽省生态工程与生物技术重点实验室，合肥 230039 【摘要】糖多孢红霉菌eryG基因编码产物为红霉素3"O(EryG)，失活 eryG基因能阻断红霉素A的生物合成，积累其中间产物红霉素C。以糖多孢红霉菌 A226基因组DNA为模版，用重叠PCR方法扩增出eryG基因两侧约1600bpDNA片 段(ΔG)，其中去除了EryG上S 域对应的290bpDNA片段。将该片段克隆于质粒pWHM3，构建了同源重组质粒 pWHMΔG。PEG介导原生质体转化法将pWHMΔG转入糖多孢红霉菌A226 中，通过染色体同源重组突变染色体上eryG基因。利用薄层层析、PCR和质谱方 法筛选出一株eryG基因突变的糖多孢红霉菌A226G-突变体，此突变体主要积累中 间产物红霉素C而不再合成红霉素A。通过eryG基因的功能补偿，糖多孢红霉菌 基因工程菌A226G-G+可以恢复红 霉素A的合成能力。 【关键词】糖多孢红霉菌;红霉素;3"O 酶;同源重组;功能补偿