实验室细胞培养支原体污染防范措施

实验室细胞培养支原体污染防范措施一、支原体污染的检测及鉴定 二、支原体污染后的清除策略 三、如何避免支原体污染支原体(mycoplasma)是一种大小仅为0. 2~0. 3um,没有细胞壁, 能通过滤

实验室细胞培养支原体污染防范措施 一、支原体污染的检测及鉴定二、支原体污染后的清除策略 三、如何避免支原体污染 支原体是一种大小仅为没有细胞壁,能通 (mycoplasma)0.2~0.3um, 过滤菌器、可用人工培养基培养增殖的最小原核细胞型 (0.22-0.4511m) 微生物。在细胞培养过程中，支原体污染率达到以上，是细胞培养中令 60% 人头疼的大问题。当细胞(特别是传代细胞)被支原体污染后，细胞内的、 DNA 及蛋白表达发生改变，污染严重时细胞生长缓慢，细胞形态发生改变， RNA 并出现细胞病变，且支原体感染不易察觉，由于支原体本身的特性，不易被 清除，会导致实验研究中资金和人力的极大损失。 一、支原体污染的检测及鉴定 1 .分离培养法 分离培养法是支原体检测的金标方法，其检测精确度最高。这种方法是 从可疑的细胞培养体系中取样，并接种到最适宜支原体生长的琼脂平板上。 如果样本中含有支原体，它们就会在这种琼脂平板上疯狂生长，最终形成明 显可见的特征性菌落。分离培养法基本不会出现假阴性结果,因此被誉为支 原体检测金标准。不过分离培养法检测时间太长，支原体要长出明显克隆至 少需要周时间，且有些支原体不能在培养基培养出来，所以该方法在常规 4 的支原体检测中多用于辅助其它检测方法。 2 .间接染色 在细胞培养中用荧光染料如或二氨基 Hoechst33342DAPI（4‘，6--2-