质粒中提说明书

质粒中提实验步骤(E.Z.N.A. TM EndoFree Plasmid Midi Kit)实验前准备1. 使用前,将RNase A全部加入Solution I中并于4度保存。2. 按下表用无水

TM (E.Z.N.A.EndoFree 质粒中提实验步骤 PlasmidMidiKit) 实验前准备 1.,RNaseASolutionI4 使用前将全部加入中并于度保存。 2.DNAWashBuffer 按下表用无水乙醇稀释，并于室温保存。 D6915-01:80ml 加入无水乙醇 D6915-03:200ml 每瓶加入无水乙醇 D6915-04:200ml 每瓶中加入无水乙醇 离心操作方案 1.E.coli30-50mlLB/37°C 将带有质粒的接种于抗生素培养液中，搖床培养 12~16h ； 2.30-50ml3,500-5,000xg10min 取的菌液，室温下离心收集细菌。 3.2.5mlSolutionI/RNaseA 倒弃培养基。加入混和液，漩涡振荡使细胞完全 悬浮。 4.2.5mlSolutionIi7-10 往重悬混和液中加入，轻轻颠倒混匀次后可将混合 2min5min 液室温放置以提高产量。避免剧烈混和裂解液且裂解反应不要超过。 5.1.25mlBufferN3 加入冰浴，并温和颠倒离心管数次至形成白色絮狀沉淀。 准备好过滤器。 6.HiBind2mlBufferGPS 把中量柱套在收集管中，加入至柱子中，静置 3-10min3000-5000xg5 。室温离心分钟。去滤液，把柱子重新放回收集管中。 7. 将裂解液倒进预先准备好的针筒过滤器中 ( 针筒开口朝上，下面出口处接收集 2min ，静置。 ) 管 8. 插入并轻推活塞使裂解液流进下面的收集管中。 9.1/10ETR7-10 在过滤澄清的裂解液中加入体积的，颠倒次后溶液变得浑浊， 10-20min 冰浴。 10.42°C5min,25°℃,3,000-5,000xg5minETR 水浴后离心，溶液将在管底形 ,10 成蓝色分层。离心后如果溶液中有大量的液滴悬浮，静置分钟让液滴自然沉 降。 11.0.5 转移上清液移至离心管中，加入倍体积无水乙醇，混匀后室温静 () 室温 1-2min 置。 12.HiBind15ml20ml 将中量柱裝在收集管中。转移混合液至柱子內，室温 3,000-5,000xg3-5min 下离心，倒去滤液。 13.12 重复该第步骤，把剩余的过滤液转移至柱子，直至所有的溶液都从柱子 滤出。 14.3mlHBBuffer 把柱子重新装回收集管，加入，按上述条件离心，弃滤液。 15.3.5mlDNAWashBuffer 把柱子重新装回收集管，加入，按上述条件离心， 弃滤液。 16.15 重复步骤一次。 17.10-15min 弃去滤液，把柱子重新装回收集管，最大速度离心 <6000xg （） 以甩干柱子基质。