枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备和转化

枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备和转化采用改进的Spizizen法进行，详述如下：A，试剂SPI-A Salts Solution：0.4% 硫酸铵（NH4）2SO4 1322.8% K2HPO4

枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备和转化 Spizizen 采用改进的法进行，详述如下： A ，试剂 SPI-ASaltsSolution ： 0.4%NHSO132 硫酸铵（） 424 2.8%KHPO·3HO228 242 1.2%KHPO136 24 0.2%TrisodiumCitrateDihydrate-2-210 （柠檬酸三钠水）即二水合柠檬酸三钠 121°20min 灭菌（每次用完要灭菌） SPI-BSaltsSolution0.04%MgSO7HO120 ： 4*2 121°20min 灭菌（每次用完要灭菌） 100×CAYEsolution:2%Casaminoacid （酪蛋白水解物） 10%YeastExtract 121°20min 灭菌（灭菌一次，每次在超净台取样） 100×EGTAsolution10mMol/LEGTA(NaOHpH8.0) ：调至 SPIMedium20ml （） SPIIMedium6ml （） 9.8mlSPI-ASaltsSolution 5.88mlSPIMedium 9.8mlSPI-BSaltsSolution 60ul50mMCaCl2 200ul50%Glucose0.1g （） 60ul250mMMgCl2 200ul100×CAYEsolution SPISPII 注：、量比较少，容易干，确保大肠转化成功再配。 B 感受态细胞的制备和转化 1.5mlLB37° 前一天晚上挑取宿主菌（单菌落）接种于一支液体摇瓶，摇床过夜 2.100ul50ml5mlSPIMedium37° 第二天早上取过夜培养的菌液，接种于离心管配好的中， 3hOD600200ul 摇床培养，后开始测（一般不用测），当培养物声场到对数末期时，快速取 2mlSPIIMedium37°100rpm1.5h 接种到中， 3.20ul100×EGTA37°100rpm10min1.5ml500ul 加溶液，，用离心管分装成每管 4.5-10ul37°100rpm30min 向管中加入适当的质粒，，轻轻混匀与 5.250rpm37°1.5h 将离心管转移到，， 6.4000rpm100ul 以离心收集菌体。弃部分上清，留重悬菌体，涂布于响应的抗性平板。 37° 过夜。 10ml50ml 离心管选用或者带螺帽的底部尖的离心管。 感受态细胞不能保存，因此，需要现做现用 AmpKan 大肠的抗性（），枯草的（）