细菌的革兰氏染色法

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细菌的革兰氏染色法 实验目的： 1．学习并初步掌握革兰氏染色法。 2． 了解革兰氏染色的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。 实验原理： 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家ChristainGram氏创立的，而后一些学者在此 基础上作了某些改进。革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。 革兰氏染色法的基本步骤是：先用初染剂结晶紫进行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇 （或丙酮）脱色，最后用复染剂（如番红）复染。经此方法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色 的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色（红色）， 该菌属于革兰氏阴性菌。 革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁的结构和组 成不同决定的。实际上，当用结晶紫初染后，象简单染色法一样，所有细菌都被染成初染剂 的蓝紫色。碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫一碘的复合物，从而增强了染料与细 菌的结合力。当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。革兰氏阳性细菌的细胞壁 主要由肽聚糖形成的网状结构组成、壁厚、类脂质含量低，用乙醇（或丙酮）脱色时细胞壁 脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱 而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。革兰氏阴性菌则不同，由于其细 胞壁肽聚糖层较薄，类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇（或丙酮）溶解，细胞 壁透性增大，使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复 染剂的红色。 实验器材： 1．菌种大肠杆菌(Escherichiacoli)约24h营养琼脂斜面培养物，金黄色葡萄球菌 (Staphylococcusaureus)约24h营养琼脂斜面培养物，蜡样芽孢杆菌（Bacilluscereus）12～ 20h营养琼脂斜面培养物。 2．染色剂革兰氏染色液。 3.仪器或其它用具显微镜，酒精灯，载玻片，接种环，双层瓶（内装香柏油和二甲苯）， 擦镜纸，生理盐水。 实验内容： 1．制片 取菌种培养物常规涂片、干燥、固定。 *要用活跃生长期的幼培养物作革兰氏染色；以免脱色不完全造成假阳性；火焰固定不宜过 热（以玻片不烫手为宜）。 2．初染