PCR技术综述

PCR技术综述08生工李国辉聚合酶链反应(polymerase chain reaction简称PCR又称无细胞分子克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法,是体外酶促合成特异DNA片段的一种

PCR技术综述 08生工 李国辉 聚合酶链反应(polymerasechainreaction简称PCR又称无细胞分子克隆系统或 特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法,是体外酶促合成特异DNA片段的一种 方法,由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的 DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点,是基因扩增 技术的一次重大革新。 PCR技术可将极微量的靶DNA特异地扩增上百万倍,从而大大提高对DNA分 子的分析和检测能力,能检测单分子DNA或对每10万个细胞中仅含1个靶DNA 分子的样品,因而此方法立即在分子生物学、微生物学、医学及遗传学等多领域广 泛应用和迅速发展。 1、PCR技术的发展简史 人类对于核酸的研究已经有100多年的历史。20世纪60年代末70年代初,人 们致力于研究基因的体外分离技术。但是,由于核酸的含量较少,一定程度上限制了 DNA的体外操作。Khorana于1971年最早提出核酸体外扩增的设想:“经过DNA变 性,与合适的引物杂交,用DNA聚合酶延伸引物,并不断重复该过程便可克隆tRNA 基因”。但是,当时的基因序列分析方法尚未成熟,对热具有较强稳定性的DNA聚合 酶还未发现,寡核苷酸引物的合成仍处在手工、半自动合成阶段,这种想法似乎没有 任何实际意义。 1985年,美国科学家KaryMullis在高速公路的启发下,经过两年的努力,发明了 PCR技术,并在Science杂志上发表了关于PCR技术的第一篇学术论文。其原理类 似于DNA的体内复制,只是在试管中给DNA的体外合成提供以致一种合适的条件 ---摸板DNA,寡核苷酸引物,DNA聚合酶,合适的缓冲体系,DNA变性、复性及延伸