浅析新型Cry1Bd蛋白和原核表达方法

浅析新型Cry1Bd蛋白和原核表达方法苏云金芽孢杆菌是革兰氏阳性菌，能够在不同的生长时期产生不同种类的杀虫蛋白。比如，对数生长中期可以分泌外毒素，其被称为营养期杀虫蛋白[1]；芽孢形成的时候会产生杀虫

Cry1Bd 浅析新型蛋白和原核表达方法 苏云金芽孢杆菌是革兰氏阳性菌，能够在不同的生长时期产生不同种类的杀虫蛋白。比 [1] 如，对数生长中期可以分泌外毒素，其被称为营养期杀虫蛋白；芽孢形成的时候会产生 [2] 杀虫晶体蛋白。其中，研究最早，最广泛的是杀虫晶体蛋白，其可分为 Cry(CrystalproteinCyt(CytoliticproteinBt ，晶体毒素）和，细胞裂解素）两大类。杀虫蛋 白的广谱性，使其成为农业研究和生产中关注的热点。 crycry1Aa1[3]Cry[4]Cry 从第一个基因被克隆之后，蛋白被相继发现。为便于对众多蛋 Cry[3]Cry 白进行归类和研究，人们建立了蛋白分类和命名的规则。蛋白的表达模式、基 [5,6,7,8,9]Cry 本空间结构和杀虫机制等均已被深入研究。目前，多种蛋白已被成功用于转 Cry1A[10];Cry1Ac 基因抗虫作物，例如蛋白在棉花中表达，可有效地减少棉铃虫的侵害 Cry1C[11] 和蛋白在花椰菜中同时表达，可使花椰菜中小菜蛾的抗性推迟；在棉花中表达 Cry2Ab[12];Cry1Ia 蛋白，能够使棉铃虫停止摄食，从而饥饿至死蛋白能够毒害鳞翅目和 [13]Cry1IaCry 鞘翅目的昆虫；同时，也是少有的能够在大肠杆菌中可溶性表达的蛋白 [14]Cry 。因此，不断筛选新的蛋白能够为农业生产提供更多的抗虫资源。 Cry1BCry1140kuCry 是类蛋白的一个分支，其分子质量大小约为，与传统的蛋白一样 33[5,6,7,8,9] 都具有个经典结构域，且这个结构域与杀虫活性密切相关。通过结构域的 Cry[15] 交换获得新的杀虫谱或改变杀虫活性，是蛋白常见的改造方式。目前，已知的 Cry1B10Cry1BaCry1BbCry1BcCry1BdCry1Be 蛋白有个亚类，分别是、、、、、 Cry1BfCry1BgCry1BhCry1BiCry1Bj[4] 、、、和。 cry1Bd 本研究以山西农业大学杂粮分子育种团队前期筛选并克隆的一个新的基因（命名 new-cry1Bdnew-Cry1BdCry1B 为）为研究对象，首先分析了该基因编码蛋白与系列蛋 cry1BdpHT304 白的亲缘关系，然后将基因克隆至质粒，并检测其蛋白表达；另外，将 new-Cry1BdN 蛋白端部分进行独立表达，检测其表达稳定性，旨在为后续研究和利用该 杀虫蛋白奠定基础。 1 、材料和方法 1.1 材料 Escherichiacoli)TG1BMB171 供试菌株为大肠杆菌（菌株和苏云金芽孢杆菌菌株。 TaKaRaprimeSTARRHSDNAPolymerasewithGCBufferR044A 试剂为（货号）试剂盒；南京 ClonExpressRIIOneStepCloningKit 诺唯赞生物科技有限公司重组试剂盒（货号 c112-021kbPlusDNAladderRTM418);AxyGEN ）；中科瑞泰的（货号质粒小提试剂盒