屋尘螨cDNA表达文库的构建及初步鉴定

屋尘螨cDNA表达文库的构建及初步鉴定 __：刘良，彭江龙，周鹰，崔玉宝【摘要】 目的： 构建屋尘螨cDNA表达文库. 方法： 用RNAiso Reagent试剂盒提取屋尘螨Total RNA，用Po

屋尘螨cDNA表达文库的构建及初步鉴定 __：刘良，彭江龙，周鹰，崔玉宝 【摘要】目的：构建屋尘螨cDNA表达文库.方法：用 RNAisoReagent试剂盒提取屋尘螨TotalRNA，用PolyATtract mRNA分离试剂盒提取mRNA，用Clontech公司__ARTTMPCR cDNAlibrarykit反转录合成第1链cDNA，用LDPCR合成第2 链cDNA并扩增，PCR产物与__xPlaxTM试剂盒体外连接包装，建 成未扩增的cDNA文库，计算其滴度和重组效率后进行文库扩增并测 定扩增文库的滴度.结果：cDNA文库未扩增时滴度为9.148×106， 重组效率达93.88%以上，文库扩增后滴度为7.628×109，插入片段 平均1.63kb.结论：成功地构建了高质量的屋尘螨cDNA表达文库. 【关键词】欧洲屋尘螨，基因文库 0引言 随着现代分子生物学技术的发展，应用基因工程变应原诊 断和治疗变态反应性疾病已成为当代变态反应学研究的主流.研究表 明，基因工程技术通过减少重组变应原IgE结合的抗原表位，能有效