酶促反应动力学实验

实验 酶促反应动力学————蔗糖酶米氏常数的测【目的要求】1．了解酶促动力学研究的范围。2．以蔗糖酶为例，掌握测定米氏常数(Km)【实验原理】 在酶促反应中，当反应体系的温度、pH和酶浓度

实验酶促反应动力学 ———— 蔗糖酶米氏常数的测 【目的要求】 1 ．了解酶促动力学研究的范围。 2(Km) ．以蔗糖酶为例，掌握测定米氏常数 【】 实验原理 pH(v) 在酶促反应中，当反应体系的温度、和酶浓度恒定时，反应初速度则随底物 [S](v)MichaelisMenten 浓度的增加而加速，最后达到极限，称为最大反应速度。和 __ 根据反应速度与底物浓度的这种关系，推导出如程： KmKm 此式称为米氏方程，式中称为米氏常数，按此方程，可用作图法求出。方法有： 1v[S] ．以作图 v=V2Km[S] 由米氏方程可知，／时，＝即米氏常数值等于反应速度达到最大反应速度 v,v[S]v 一半时所需底物浓度。因此，可测定一系列不同底物浓度的反应速度以对作图。当 V2Km ＝／时，其相应底物浓度即为。 21v1[S] ．以／对／作图 取米氏方程的倒数式： 1v1[S]KmV1/V 以／对／作图可得一直线，其斜率为／，截距为。若将直线延长与横轴 —lKm 相交，则该交点在数值上等于／。 ( 本实验以蔗糖为底物．利用一定量蔗糖酶水解不同浓度蔗糖所形成的产物葡萄糖和果 )Km35— 糖的量来计算蔗糖酶的值。葡萄糖和果糖能与，二硝基水杨酸试剂反应，生成桔 520__ 红色化合物，可于处比色测定之。 【】 试验材料 1 ．试剂 (1)100mg(0.3%) 标准葡萄糖溶液：准确称取葡萄糖溶于少量饱和的苯甲酸溶液，再转移到