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专题1   基因工程基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过体外DNA重组和转基因技术,赋予生物以新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA分

专题1 基因工程 基因工程的概念 体外DNA重组和转基因技术, 基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过赋 新的遗传特性更符合人们需要的新的生物类型和生物产品 予生物以,创造出。基因工程是在 DNA分子水平DNA重组技术 上进行设计和施工的,又叫做。 (一)基因工程的基本工具 限制性核酸内切酶(限制酶) 1.“分子手术刀”—— 原核生物 (1)来源:主要是从中分离纯化出来的。 特定 (2)功能:能够识别双链DNA分子的某种的核苷酸序列,并且使每一条链中 特定磷酸二酯键专一 部位的两个核苷酸之间的断开,因此具有性。 黏性末端平 (3)结果:经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式:和 末端 。 DNA连接酶 2.“分子缝合针”—— (1)两种DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和TDNA连接酶)的比较: 4- 磷酸二酯 ①相同点:都缝合键。 T 噬菌体黏性末端 ②E·coliDNADNA 区别:连接酶来源于,只能将双链片段互补的之间 4 两种末端 TDNA 的磷酸二酯键连接起来;而连接酶能缝合,但连接平末端的之间的效率较 4 低 。 单个核苷酸 (2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将加到已有的核苷酸片段的末 两个DNA片段 端,形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接的末端,形成磷酸二酯键。 载体 3.“分子运输车”—— 能在受体细胞中复制并稳定保存 (1)载体具备的条件:①。 具有一至多个限制酶切点,供外源DNA片段插入 ②。 具有标记基因,供重组DNA的鉴定和选择 ③。 质粒裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外, (2)最常用的载体是,它是一种 并具有自我复制能力的双链环状DNA分子 。 噬菌体的衍生物、动植物病毒 (3)其它载体: (二)基因工程的基本操作程序 目的基因的获取 第一步: 编码蛋白质的结构基因 1.目的基因是指:。 直接分离人工合成反 2.原核基因采取获得,真核基因是。人工合成目的基因的常用方法有 转录法化学合成法 _和_。 3.PCR技术扩增目的基因 DNA双链复制 (1)原理: DNA解链引物结合到互 (2)过程:第一步:加热至90~95℃;第二步:冷却到55~60℃, 补DNA链热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成 ;第三步:加热至70~75℃,。 基因表达载体的构建 第二步: 稳定存在遗传至下一代表达 1.目的:使目的基因在受体细胞中,并且可以,使目的基因能够 和发挥作用 。 目的基因启动子终止子标记基因 2.组成:+++

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