高效液相出现双峰的原因

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HPLC 分析中，在色谱柱正常，样品灵敏度足够，分析方法合适，色谱峰在出峰时间较短的 条件下（不包括梯度），峰型应对称而尖锐。但是，在对样品了解程度不够，方法不妥，样 品处理方法及进样方式不合理下，会出现各种意想不到的问题，而对色谱峰难以作出合理的 解释，尤其对于新手更是如此。下面根据本人几年工作的体会，提出一些看法，向同仁指教。 色谱双峰指的是明是一种物质，但在色谱图中出现双峰，而表明含二种物质。我将这种情况 分为四种原因。 1 色谱柱如果你分析样品时发现每个色谱峰都双峰出现（出峰越快，双峰的可能性会减少）， 尤其采用单一纯物质时，可以肯定色谱柱出问题－柱头受损或柱头固定相变脏或流失。如果 进样量少，原来色谱柱正常，色谱峰的形状多为一大峰带一小峰，不一定拖尾，这一般应是 柱头受堵，将色谱柱反过来接，用流动相冲洗或酸洗或其它溶剂，将堵在柱头的残留物冲掉， 再反过来，一般情况下就行了。当然不反冲，正冲有时也会正常的。如果峰拖尾，双峰强弱 相差不大，柱头固定相变脏或流失可能性更大，这是可以将进样那头拧开，将微孔滤片超声， 柱头刮去一部分填料，重新填上新填料拧紧，不过这种活，需要一定技术，同时不能老干那 种事，否则用不了几次，色谱柱就会应柱效很低而报废。 2HPLCHPLC 溶剂极性及进样量许多分析者对此可能不以为然，一般的的书籍和文献都 HPLC 不会提到这方面的内容，而这确是双峰产生的一个很重要的原因。目前分析多为反 相色谱，流动相多为甲醇、乙腈、水，加各种添加剂以改善分离性能。样品一般用与流动相 相溶的溶剂溶解。最佳的溶解方法是用流动相溶解，但是很多情况是不一致的。当用溶剂极 性强度大的试剂，如纯甲醇、纯乙腈，纯乙醇，而分析体系中以水为主，样品进样量大，如 20ul 定量管为，此条件下完全可以肯定，单一的纯物质出双峰，第二峰比第一峰小（每次 () 都不太一样），且拖尾，保留时间会提前相对进样量少而言，将进样量减少一半以上，峰 型将变为正常。这是样品的溶剂与流动相极性相差太大，而流动相来不及将其稀释达到平衡 造成的。上面提到进样量造成双峰的一个原因，另一个原因是，进样量不一定大，但绝对量 很大，色谱图上的双峰紧靠在一起，基本上齐高，不拖尾（如果出峰很快，也可能是色谱柱 问题）。将样品稀释再进样就可以了，这是由于进样量过大，色谱柱过载造成的。 3 样品的特性有些样品由于其化学结构的特点，存在互变异构现象，而这种互变异构体无 法分开，而是以一个动态平衡存在。在色谱分析时，在一个特定的条件下，一种物质将出现 pH 双峰，双峰靠的很近，基本齐高，不拖尾，条件稍一变化，尤其，双峰现象将消失，如 LCMS 红霉素等。有的样品紫外的色谱图上看不到双峰，但在－下，用质谱检测器，其质 谱的总离子流图上较明显，例如我分析过的农药啶虫眯（吡虫清）。 4GCHPLC 参数记录的参数一般都内定的，不必修改，但和的参数是不完全一致的，例 CR3AGC2msHPLC5ms 如－数据记录仪上的一般记录时间间隔为，为，如果记录间隔 时间缩短，一个峰将变为二个峰或更多。 高效液相反相梯度色谱中出现鬼峰的原因 鬼峰产生的原因是多种多样的，现将原因归纳为以下几个方面： 1 、流动相、样品稀释液、仪器或是容器中存在杂质，当梯度开始时由于有机相比例不高， 洗脱能力不强，杂质在色谱柱柱头富集，随着流动相比例变化，洗脱能力增强，富集的杂质 被洗脱，从而形成鬼峰。