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引物二聚体的形成
什么是引物二聚体?怎样消除引物二聚体"是引物的3'端间相互错配扩增形成的。引物二聚体的出现是必然的,只是或多或少的问题,电泳时看不到引物二聚体带也不代表没有二聚体出现,只是含量低我们的肉眼看不到而已。
减少PCR产物中引物二聚体的方法
减少PCR产物中引物二聚体的方法.从引物自身着手,重新设计引物,这是最根本解决这一问题的办法;.可能模板有问题;.模板浓度过小,适当加大模板量;. Taq酶,引物,Mg2+浓度可能过高,可降低它们的浓
引物设计步骤
分享:简并引物设计过程及原则 简并引物常用于从已知蛋白到相关核酸分子的研究及用于一组引物扩增一类分子。 简并引物设计过程 (1)利用NCBI搜索不同物种中同一目的基因的蛋白质或cDNA编码的氨基酸序列
引物设计(丁香园)
引物设计有3条基本原则:首先引物与模板的序列要紧密互补,其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构,再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应(即错配)。 具体实现这3条基本原则需要考虑
保护碱基添加总结
酶切位点保护碱基表6 酶寡核苷酸序列切割率%2 hr20 hrPvu ICCGATCGG ATCGATCGAT TCGCGATCGCGA0 10 00 25 10Sac ICGAGCTCG
引物设计总结
引物设计注意事项引物设计需要注意的地方很多,在大多数情况下,我们都是在已知模板序列时进行PCR扩增的,在某些情况下,比如在构建文库时也会在不知模板的情况下进行设计。这时候随机核苷酸序列就与模板不是完全
引物设计原则(含Realtime引物)
1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因,通过序列分析软件(比如DNAman)比对(Alignment),各
引物设计流程之基因编码区(CDS)扩增引物设计
PCR引物设计流程(以扩增鹅PHIP基因编码区序列为例)流程图确定模板确定模板来源物种近亲物种 :原鸡,绿头野鸭,鸽,雀,鹦鹉,蜂鸟等常用物种 :灵长类(人,大猩猩,恒河猴),哺乳类(大鼠,小家鼠,猪
影响PCR的因素
影响PCR反应的条件(1) 引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。设计引物应遵循以下原则:①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
引物自由能问题
引物末端自由能必须<-4kcal/mol,是-2、-3呢还是-5 -6? 您的问题可以在下述内容中找到答案,愿您实验顺利: 在一个双链结构中,碱基对的相对稳定性是由其邻近碱基决定的。在热动力学中,这样
5-RACE经验
5 Race(2007-11-18 21:37:08) HYPERLINK "javascript:;" INCLUDEPICTURE "http://simg.sinajs.cn/blog7st
PCR引物设计原则
PCR引物设计原则设计的目的是在两个目标间取得平衡:扩增特异性和扩增效率。引物分析软件将试图通过使用每一引物设计变化的预定值在这两个目标间取得平衡。设计引用有一些需要注意的基本原理:① 引物长度一般引